杂交瘤培养基推荐使用方法

推荐使用

经MOPS缓冲的 TurboDoma培养基

纯合成培养基中挑选杂交瘤细胞的建议

虽然，杂交瘤细胞的生长依赖于外源性营养物质的补充，如：血清、白蛋白、水解产物、蛋白质等，但是，仍可应用化学合成的TurboDoma培养基进行细胞培养。总之，你目前使用的培养基中营养补充成分越少，细胞从这种蛋白依赖型培养基过渡到适应TurboDoma完全无蛋白培养基的速度就会越快。

1.通过离心过滤（380转，3分钟）采集细胞后，加入TurboDoma培养基，使细胞能够再次悬浮，且细胞密度应达到1 x 105/ml，如：将2 x 106 细胞接种在75 cm2细胞培养瓶中，加入20 ml TurboDoma培养基。如果，培养基的pH值低于支持细胞生长的范围，即pH值< 7.0，培养基的颜色从橘红变为淡黄，这时，需另加入20 ml新鲜培养基，使培养基体积增大一倍。上述情况通常在接种后3-4天出现。

2.注意观察细胞生长时的状态。细胞培养4-5天内，由于细胞内蛋白质的丢失，会导致大量细胞的死亡。但是，仍有一些代谢活跃的细胞能够很快适应新的生长环境。

3.正在生长的细胞由于乳酸的产生会引起pH值的下降。当培养基的pH值低于支持细胞生长的范围时，倒出50%的培养基，然后，再加入50%新鲜的培养基，继续进行培养。如果更换培养基的间隔时间越来越短，例如：细胞表现出旺盛的代谢能力，那么，就可增加新鲜培养基的量，直至将剩余的培养基全部换为新的培养基。

4.为了细胞增殖能够达到满意的效果，必须保证培养过程中使用相同的培养瓶。而且，我们建议：在细胞适应TurboDoma培养基的过程中，要频繁地更换培养液，不要急于传代。细胞需要逐渐适应新的培养环境。

5.悬浮细胞生长时，最初，可能会形成50个细胞左右的细胞团，大小不一。渐渐地，细胞团慢慢消失，细胞逐渐扩散增殖。对于悬浮细胞的传代培养，可通过稀释培养液或加入新鲜培养基来进行。

注意：细胞培养过程中，为了能够使细胞在24小时内进入正常生长周期，必须等细胞生长密度达到一定程度时才可分瓶，进行传代培养！