非发酵菌的种类与鉴定试验

非发酵菌是指一群不能发酵葡萄糖或仅能以氧化形式利用葡萄糖的革兰氏阴性杆菌。部分非发酵菌在临床上具有致病性，为机会致病菌。近年来此类细菌从住院病人的痰、尿、血液、体液标本中的分离率日渐增高。

分类与命名：

主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：

假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群

①rRNAⅠ群/假单胞菌属；

②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；

③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；

④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；

⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；

⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等

产碱杆菌科：产碱杆菌属；

黄杆菌科：华丽杆菌属

莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；

甲基球菌科；

根瘤菌科。

非发酵菌的基本鉴定要求

缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。

氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。

麦康凯上生长很差或不生长。

动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。

重要的鉴定试验

葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。

氧化酶试验：细胞色素氧化酶的产生与否鉴别分类    

氧化酶试验阳性的非发酵菌主要有：假单胞菌属、伯克霍尔德菌、无色杆菌属、希瓦氏菌属、  黄杆菌属、莫拉菌属等。

氧化酶试验阴性的非发酵菌主要有：不动杆菌属、窄食单胞菌等。

（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4 mm，在培养4-6小时后观察结果,24和48小时后再次观察结果。更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。

（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。

（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。

（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等。

（7）硫化氢：腐败希瓦菌是非发酵菌中**在KIA和TSI上产硫化氢的菌种。

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该试剂盒包含两个生化试剂卡，可一次性进行多种生理生化实验，主要包括的实验有：

鉴定卡1

鉴定卡2

待鉴定菌种应先进行分离和纯化。可在营养琼脂（MV001/MV1274）或脑心浸膏琼脂（MV211）上挑取一个菌落，接种在５ml脑心浸膏肉汤中，35-37℃培养4-6小时，直到在620nm处，接种液浊度≥0.1OD或0.5 McFarland标准。 无菌打开试剂盒，撕掉封条。每孔接种50μl上述菌液。也可用接种环划线。35℃-37℃孵育24-48小时后，按说明书操作。

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