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制药行业对『洋葱伯克霍尔德菌』的分离和鉴定

2020-04-06 13:36

近些年，
『洋葱伯克霍尔德菌』引起医用产品污染，
进而导致患者严重感染的事件，
被越来越多的制药企业和药监管理系统所重视。
要求在制药企业中，
针对非无菌药品进行普查。

在美国FDA，『洋葱伯克霍尔德菌』被看作是不可接受微生物。
2019年12月1日，
美国在其《药典》中新增一章《非无菌药品的检查——洋葱伯克霍尔德菌的检验》，
并予以正式实施。
我国在《中国药典》2020年版中也将新增洋葱伯克霍尔德菌的检查指标。

洋葱伯克霍尔德菌是一类过氧化氢酶阳性、

不发酵乳糖的革兰氏阴性菌。

因为容易导致洋葱腐烂，

最初被称为洋葱假单胞菌。

1992年它被划归为一个独立的菌属。

实际上它有时又被称为洋葱伯克霍尔德菌复合体

（Burkholderia Cepacia Complex），

因为它是由大约15种至20种相近的物种组成

（均为伯克霍尔德菌属）。

洋葱伯克霍尔德菌是一种条件致病菌，
可引发包括肺炎、败血症、心内膜炎、伤口感染、脓肿在内的多种感染。
它最厉害的地方在于，
它可形成生物膜，
对消毒剂的抵抗力较强，
在恶劣条件下也能生存，
并对多种抗生素有很高的耐受性。
因此一旦得上，
治疗就不太容易。



应如何进行检查呢?

  1. 美国药典（USP）建议先用TSB肉汤进行增菌（30~35℃，48~72h），

  2. 再用洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂培养基（简称BCSA）进行洋葱伯克霍尔德菌的分离。

  3. 对分离的可疑菌落进行鉴定。我们推荐HiMedia公司生产的非发酵菌生化鉴定试剂盒进行鉴定。该试剂盒包含了12种生化试验和12种糖发酵试验。可鉴定66种非发酵菌，其中包括洋葱伯克霍尔德菌。该试剂盒准确可靠、操作简单、无需仪器、无须编码、省时省力。

注意事项

USP指定了培养基中的四种成分——结晶紫、庆大霉素、万古霉素、多粘菌素B，用于抑制其他的微生物。

在培养基正式使用之前，也要对培养基进行生长促进等方面的适用性检查。





培养基介绍






洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂

11.jpg

英文：Burkholderia Cepacia Selective Agar（BCSA）

货号：M2089

规格：500g/瓶

品牌：HiMedia

配制：BCSA培养基为干粉。

取50.6g溶于1L蒸馏水，加热至沸腾使完全溶解。

15磅121℃灭菌15分钟。

冷却至45-50℃，混匀并倾注于无菌平皿。

制备好的培养基橙色透明至轻微不透明，pH值为6.90-7.10。

孵育条件：接种后在30-35°C孵育18-72h


质量控制
1

外观

淡黄色至粉色均匀可自由流动的粉末

2

成胶性

牢固，与1.4%琼脂凝胶相当

3

配好的培养基颜色和透明度

平皿内为橙色透明或轻微不透明凝胶

4

pH值

6.90-7.10

5

培养反应

30-35°C培养18-72小时，观察培养结果，确保达到如下标准



12.png




非发酵菌鉴定试剂盒介绍






非发酵菌鉴定试剂盒

13.png


英文：Hi24? Nonfermenters Identification Kit

货号：KB019

规格：5KT/盒，10KT/盒，20KT/盒

品牌：HiMedia

操作：待鉴定菌种应先进行分离和纯化。

挑取单个可疑菌落，

在5ml脑心浸膏肉汤35-37℃增菌4-6小时，

直到在620nm处，

接种液浊度≥0.1OD或0.5麦氏单位。

每孔接种50μl上述菌液。

孵育条件：35℃-37℃孵育24-48小时。

依据结果诠释表和菌种标准表完成鉴定。



HiMedia   Laboratories公司是全球三大培养基生产厂家之一，是国际知名微生物产品生产商一直致力于微生物培养和鉴定产品的研发和生产，总部位于印度，有近50年的生产研发经验。它有3000多种产品，HiMedia公司的显色培养基种类齐全、性价比高，具有WHO-GMP认证、ISO9001，ISO13485认证，CE和FDA注册登记。其产品已行销全球140多个国家。


需要了解更多微生物培养详情，可以访问中国总代理网站

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