支原体核酸法的灵敏度验证

支原体核酸检测法（常规PCR、荧光定量PCR）

应用于细胞培养、生物制药工业和细胞治疗等领域。

和传统方法比较，它具有

①灵敏度高，特异性好。

②时间短，2-3小时出结果。

③操作简单等特点，可替代传统的培养法和DNA染色法。

在生物制药工业和细胞治疗领域，

欧洲药典和日本药典均要求对支原体核酸法进行方法学验证，

其中灵敏度的验证是关键的一个环节。

欧洲药典和日本药典要求，

如果用PCR法替代培养法检测支原体时，此PCR检测的灵敏度需达到10CFU/ml。

如替代DNA染色法，其灵敏度需达到100CFU/ml，并规定了支原体的范围，即包含9种支原体（见下面表1）。

据小编市场调查后发现，德国MB公司（全称Minerva Biolabs）生产的【10CFUTM支原体灵敏度标准品】广泛被国际和国内各大药厂所使用，被称为该领域的“金标准”。

其中，【10CFUTM支原体套装】包含了欧洲药典（EP 2.6.7）和日本药典（JP, 17. edition, chapter G3）列举的所有支原体物种，可用于qPCR和PCR方法的灵敏度以及耐用性验证，使得核酸法可作为传统培养法和染色法的替代方法。

中文品名：10CFU?支原体灵敏度标准品套装

英文品名：10CFU? Mycoplasma Set Sensitivity Standard   

货号：102-0002                   

生产商：德国MB公司

规格：共9种支原体10CFU标准品冻干粉，每种标准品2管+阴性对照2管/盒

保存：冻干粉在2-8℃保存

表1.   EP 2.6.7和JP, 17规定的全部9种支原体标准品明细

说明：

以上支原体10CFU?标准品也可单独购买。单独购买的规格为10CFU标准品3管+阴性对照2管/盒。另MB公司也提供10CFU的唾液支原体标准品。

01、产品特点

1> 来自英国菌种保藏中心NCTC，为标准支原体株

2> 支原体已灭活，不会对实验室造成污染，保障细胞实验室安全

3>传代次数少，支原体无变异

4>产品为冻干粉，保证其稳定性

5>分析证书（COA）提供该批次GU：CFU比值（支原体基因组/菌落数比值）

02、使用说明

试剂使用前，先达到室温平衡。

1>标准品管离心，以收集冻干粉至管底。

2> 每个管中添加1ml样品基质液（注：非待测样本）。

3> 室温静置5分钟。

4>涡旋振荡10秒钟，再离心10秒钟。

5>使用合适的体积用于DNA抽取。推荐使用MB公司生产的支原体DNA提取试剂盒。该试剂盒一次所需样本量为200μl。另需加内控对照12μl，以监测提取过程。

6> 取10ul抽提DNA用于PCR扩增。

阴性对照样品的制备，步骤同上。