Biocoll细胞分离液

Biocoll细胞分离液是最早由德国Biochrom公司推出的新一代分离液。它除了可分离淋巴细胞外，更常用于胰岛细胞的分离。胰岛细胞的移植是一种有效的糖尿病新型疗法，可解决特别是I型糖尿病患者的胰岛细胞不足及功能低下的问题。

早在2006年，就有文献报道Biocoll细胞分离液可有效分离胰岛beta细胞，细胞活力和功能都维持良好。但在应用Biocoll细胞分离液时，应注意如下事项（以下仅供参考，具体还需实验者自我确定最终方案）：

一、分离方法会影响胰岛的产率和存活率：

因此，取材时需要注意

1.胰脏应快速取材，保持包膜完整。

2.建议采用UW溶液运输。

3.对胰脏进行评估，在消化酶灌注前去除多余的脂肪和残留的十二指肠和脾脏。

4.消化过程不宜进行震荡，以保证胰腺组织被灌注的消化酶液消化，而不是被胰腺所释放的胰蛋白酶消化。

5.要保证胰岛的包膜完整，消化不能太充分。宁可不足，也不可过头，否则会影响胰岛纯化的产率。

二、分离胰岛细胞时的注意事项：

1. biocoll分离液使用时，是采用连续密度梯度，需要分别配制密度为1.065g/mL（UW溶液与Biocoll混合）和密度为1.095 g/mL（UW溶液与Biocoll混合）的溶液，二者再混合。

2. 分离时离心1800rpm，可考虑离心10分钟，之后使COBE细胞分离机保持4℃，防止酶激活导致结构完整性破坏。

3. 胰岛在最轻密度层，随着密度增加，也会有部分胰岛，但外分泌组织也会增多。

Biocoll细胞分离液（货号L6155）为澄清无色无菌溶液，密度为
1.10 g/ml
，500ml/瓶。它含有一种高分子聚合物，分子量约为400kDda，为即用型，也可用去钙镁离子的PBS调整密度。它内毒素低（＜2IU/ml），可保护细胞。使用时可按下列流程进行：

1.分别将7mL和10mL
Biocoll细胞分离液（D=1.077g/mL,20℃）放入15mL和25mL的离心管中。

2.将肝素化抗凝全血（50U/mL肝素,无稳定剂）与等体积培养基混合均匀，小心添加在Biocoll细胞分离液的液面上。

3.1200g离心20min。用巴斯德吸管吸取（70-100%）淋巴细胞富集层（位于血浆和Biocoll之间），加入培养基中洗2次，*300g离心10min.*200g离心10min，即得所需淋巴细胞，可以按常规方法进行细胞计数等实验。

附1：血细胞在连续密度梯度中的分布

附2：用去钙镁离子的PBS稀释Biocoll的配比公式

D1：要配制的密度（如1.06）

D： 不含钙镁离子的PBS的密度（1.005）

D2：母液的密度（1.10）

V%: 应加母液的百分比

目前Biocoll细胞分离液(L6155)备有现货，欢迎垂询。

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