Biocoll细胞分离液的应用

组织和血液中的细胞常非单一类型，因此分离特定的细胞需要采用专门的方法。其中，最常用的是密度梯度离心法。即通过细胞分离液在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，将细胞悬液置于液体的上部，通过离心力场的作用使细胞分层分离。

在市面上常见的细胞分离液中，Biocoll是常用且较为知名的一种。它诞生于2007年，当时发现一种亲水高分子聚合物，分子量约为400Kda，用于分离淋巴细胞和胰岛细胞效果良好，可很好地保持所分离细胞的功能。随后，Biocoll细胞分离液被美国NIH指定为胰岛细胞的专用分离液。

Biocoll是德国Biochrom公司出品，有1.10g/ml和1.077g/ml两种。1.10g/ml可再用无钙镁离子的PBS调节为其他浓度。代理商北京缔一生物公司暨上海威正翔禹生物公司备有1.10g/ml密度的Biocoll分离液现货，方便研究者对血细胞或淋巴细胞的分离。

对于淋巴细胞分离，它的使用步骤如下：

1）将7mLBiocoll细胞分离液（D=1.077g/mL, 20℃）放入15mL离心管中?；蚪?0ml Biocoll细胞分离液放入25mL离心管中。

2）将肝素化抗凝全血（50U/mL肝素，无稳定剂）与等体积培养基混合均匀，小心添加在Biocoll细胞分离液的液面上。

3）1200g离心20min。

4）用巴斯德吸管吸?。?0-100%）淋巴细胞富集层（位于血浆和Biocoll之间），加入培养基中洗2次，一次300g离心10min，另一次200g离心10min，即可得所需淋巴细胞，接着可进行常规细胞计数。

Biocoll细胞分离液为即用型，渗透压和pH值已调整为最适水平。下图为不同类型血细胞对应的分离密度。

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