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支原体qPCR检测的结果诠释

2020-12-01 16:12来源：威正翔禹|缔一生物


支原体qPCR检测不仅用于细胞培养的支原体筛查，也用于生物制品行业的放行检测，但前提是要有方法验证。

无论是否遵循药典，支原体qPCR检测的结果判定都需要一定的标准。下面小编结合德国MB厂家的支原体qPCR说明书及相关文件，给予进一步的阐释。


一、荧光检测通道的结果诠释

用MB公司的qPCR试剂盒检测时，qPCR仪的FAM通道检测支原体荧光信号，HEX通道检测内控对照（简称IC）的荧光信号（如没有HEX通道，可用VIC通道）。IC是用于监测qPCR反应是否正常。对于这两个通道，Ct＜40为阳性结果。Ct≥40为阴性结果。支原体DNA和IC存在信号的竞争性抑制。

在阴性对照和阳性对照均结果正常的前提下，根据FAM?通道和HEX通道的检测结果，可判别样品是否有支原体污染。具体见下表：


表1. FAM?通道
(支原体) 和HEX? (IC) 通道的结果诠释


检测支原体

FAM?通道

内控对照

HEX?通道

结果说明

+

+或-

支原体阳性

-

-

结果无效，需重新检测

-

+

支原体阴性



需要说明的是：

内控对照可在支原体DNA抽提时加入。如果结果无效，则说明抽提失败，或者qPCR存在抑制。如果内控对照是在qPCR反应时加入，则说明qPCR存在抑制。


二、对照与样品的结果诠释（适用于符合EP/JP的检测）

对于遵循EP/JP的检测，具体数据诠释见表2。


样本

结果

意义

进一步的行动

无模板对照

阴性

PCR有效

分析样本数据


阳性

PCR有污染

再重复PCR，检查污染来源（如预混液、水、仪器）

阳性对照

阴性

PCR失败

重复PCR，检查反应失败原因（如漏加试剂、试剂陈旧、加样错误，PCR程序错误）


阳性

PCR有效

分析样本数据

阴性对照

阴性

PCR有效

分析样本数据


阳性

抽提或PCR有污染

重复抽提和PCR，检查污染来源（如缓冲液、预混液、水、仪器），同时，如果无模板对照为阳性，应考虑为PCR污染，应再重复PCR

样本

阴性（0/2）

无污染

生物制品放行


阳性（1/2）

可能有污染

包括抽提在内的全部过程需要重复以评估潜在污染。如果同时无模板对照为阳性，考虑为PCR污染，应再重复实验。模棱两可的结果会影响产品放行。


阳性（2/2）

有污染

生物制品不放行



表2.结果判定的前提是：qPCR检测试剂盒符合EP/JP的要求。



三、MB公司支原体qPCR试剂盒(经典法)

德国MB公司的支原体qPCR检测试剂盒(经典法)(英文名：Venor?Gem qEP)经过厂家全面的方法验证，符合欧洲药典/日本药典要求，适合细胞治疗，CAR-T，抗体药、疫苗等临床项目申报和质检。

需注意样本要先做DNA抽提，再进行qPCR检测。MB还提供用于PCR/qPCR方法验证的配套的支原体10CFU、100CFU菌株标准品、特异性验证用支原体基因组DNA和细菌基因组DNA、支原体DNA绝对定量标准品（基因组拷贝数经严格标定）。


四、德国MB公司介绍

德国MB公司，全称Minerva Biolabs，是世界**的微生物污染控制公司，成立于1999年，总部位于德国柏林。

公司创始人来自于全球闻名的罗伯特?科赫微生物研究所。

二十年来，MB公司专注于微生物污染检测与清除，

特别是支原体和军团菌的技术和产品，在世界上遥遥领先。

1.自1999年起即研发细胞培养和生物药工业用QC检测试剂

2.配备生物安全二级实验室

3.GMP级洁净车间生产

4.世界**的支原体PCR检测试剂供应商

5.IOM和PDA成员

6.ISO 9001和ISO 13485认证


注：IOM全称Institute of Medicine

PDA全称Parenteral Drug Association



2007年，上海威正翔禹生物科技有限公司作为MB公司的全国总代理，将支原体检测防控的优秀产品引入中国。十几年来，不断为中国生物研究实验室，以及众多生物制药企业，提供了完整高效的支原体等微生物检测及祛除解决方案。


想了解更多关于产品的信息可咨询：

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