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技术专栏

培养细胞时的细菌检测

2021-03-29 15:25来源：威正翔禹|缔一生物

细胞培养是生物医学研究的常见操作，其中避免细菌污染是重要一环。对于生命科学实验室，早期就检查培养细胞中是否存在细菌污染，对于解决细胞污染问题，是一个合理的选择。

据估计，高达5%的细胞培养物发生过细菌污染，并且缺乏肉眼可见的细菌污染迹象，如浑浊、培养基突然变色(酚红)或出现微生物颗粒。此外，细菌可对标准抗生素(如青霉素/链霉素)表现出耐药性，并直接影响细胞代谢、生长和分化。因此，采用一款快速、灵敏、可靠的细菌检测试剂盒，就显得尤为必要。

德国MB公司专门设计的细菌PCR检测Kit可以直接检测细胞培养、细胞培养衍生的生物制剂和细胞培养基中的细菌污染。下面小编介绍一下。

一、产品信息

培养细胞时的细菌检测1.jpg

二、产品描述

该试剂盒采用PCR方法，用于检测生物样品（包括细胞培养物和病毒贮存液）中是否存在细菌。

该试剂盒针对细菌16S rRNA基因高度保守区。根据序列一致性，可至少检测污染细胞常见的45种细菌属，具体如下：

放线菌Actinomyces

芽孢杆菌Bacillus

肠球菌Enterococcus

埃希氏杆菌Escherichia

梭菌Fusobacterium

克雷伯氏菌Klebsiella

乳酸杆菌Lactobacillus

微球菌Micrococcus

分枝杆菌Mycobacterium

假单胞菌Pseudomonas

卟啉单胞菌Porphyromonas

普氏菌Prevotella

沙门氏菌Salmonella

沙雷氏菌Serratia

军团菌Legionella

葡萄球菌Staphylococcus

链球菌Streptococcus

消化链球菌Peptostreptococcus

该试剂盒灵敏度达到100个基因组拷贝/PCR反应。

说明：该试剂盒只用于科研，不用于工业QC。

三、试剂盒包括：

冻干型PCR mix：含引物/核苷酸/内控对照DNA /热启动聚合酶；

复溶缓冲液；

冻干型阳性对照DNA；

PCR级水。

四、样本处理

样本不用提DNA，只需热灭活（95 °C 5分钟）；

样本需不含抗生素，如含抗生素，则细胞应在不含抗生素的培养基中培养至少一代后再检测。

五、反应体系

25μl反应体系：含20 μl PCR Mix和5μl模板。

六、结果判定

PCR结束后在琼脂糖电泳上跑胶。典型结果如下图所示。

图. 电泳分析结果。左侧为内控对照条带，在140bp，用于排除假阴性。如有内控条带，则显示PCR反应正常，样本中无PCR抑制成分。右侧为目的条带，在467bp左右。如有目的条带，则提示有细菌污染。

七、产品引用文献

Simonsen ?. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.