DIY外泌体专用血清的常用方法

各位小伙伴们，晚上好！

今天文章的主题是无外泌体血清。

外泌体大家应该都很熟悉。1983年，在绵羊网织红细胞中**发现了现在生物学研究领域炙手可热的“小网红”——一种特殊囊泡结构，并与1987年正式被命名为“exosome”。

越来越多的科研人员投入到外泌体的研究中，根据PubMed统计显示，最近几年，外泌体研究呈爆炸增长。

外泌体的研究离不开细胞培养。以肿瘤相关外泌体研究为例，目前，收集肿瘤细胞外泌体主要有两种方法：

从现有的一些研究可以看出[1][2][3][4][5]，研究人员更倾向于方法二，也就是使用exosome-free FBS培养细胞再收上清分离exosomes的方法，至少肿瘤研究方面是这样的。

相关文献在这里

所以，接下来就不得不讲讲exosome-free FBS——无外泌体血清了。

顾名思义，无外泌体血清就是外泌体含量极低，低到几乎没有的血清（以粒径分析结果为标准），获得主要有两种途径：

直接购买商品化的产品

自己DIY制备

如果选择自己制备无外泌体血清，最常用的方法就是超速离心法。主要有三种策略：（前提是将血清用正确的方法彻底解冻，分装，按照实验需求选择合适用量进行去除外泌体的实验，血清解冻方法请参照这里：如何解冻血清才能**程度保证活性？）

P.S.其中，离心的过夜时间要视情况而定，一般在10-14小时之间，也可适当延长离心时间。

需要注意的是，离心后，外泌体会富集在试管底部，在吸取上层血清的时候，不要触碰底部沉淀，避免吸到沉底的外泌体，“一夜回到解放前”。

另外，只吸取80%左右的上层血清，其余的浑浊血清留作其他非外泌体用途细胞的培养，毕竟血清也挺贵的，避免不必要的浪费。

针对超速离心后的血清，可进行粒径检测（离心前样品和离心后样品），如果觉得纯度不够，再把离心后收集的血清做二次超速离心。

当然啦，以上方法也只是我们根据已有文献和相关实验室的经验总结的来的，仅供大家参考，如果有更好的方法，也欢迎在评论区和我们交流！

选择自己手动DIY无外泌体血清，可以在一定程度降低血清的成本，Ausbian血清，高品质，实验更安心，用来DIY成外泌体实验专用血清也是不错的选择。