细胞培养中的污染监控与检测——细菌

一、细菌污染

细菌概述

细菌是一种原核细胞微生物，一般为微米级别。细胞培养过程中常见的污染菌为大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌等。

细菌污染症状

与其他污染相比，细菌污染在细胞培养过程中“发病”更为迅速，较容易被发现。具体表现为：

• 细胞培养基短期内变黄且浑浊（大量酸性物质累积）

• 静置的培养液时不浑浊，但稍加震荡，就有许多浑浊物漂起

• 可见培养液中有大量圆球状颗粒物漂浮

• 细胞停止生长并有中毒表现，后出现大量死亡

细菌污染鉴定

简易方法：

1、取少量培养液涂片染色检查，凭经验判断细菌种类。

2、向肉汤培养基内滴入少量培养液，37 ℃培养以检测。

专业试剂盒检测。以Minerva Biolabs公司的细菌PCR检测试剂盒为例（点击下方图片直达微信商城，了解更多详情）：

该试剂盒采用PCR方法，用于检测生物样品（包括细胞培养物和病毒贮存液）中是否存在细菌。根据序列分析，该试剂盒可检测超过45种细菌属，其中含污染细胞的常见菌属：

试剂盒包括

冻干混合物：含引物/核苷酸/内部扩增对照DNA /聚合酶

复溶缓冲液

冻干的阳性对照DNA

PCR级水

样本处理

样本不用提DNA，只需热灭活（95 °C 5分钟）。样本需不含抗生素。如含抗生素，则细胞应在不含抗生素的培养基中再培养至少一代。

保质期

2-8℃可保存至少6个月。

冻干试剂溶解后，需在-18℃以下保存。

结果分析：

内控对照显示PCR反应正常，样本中无PCR抑制成分。460bp左右存在目的条带，提示存在细菌污染。

细菌污染的祛除

对于一般细胞：发生污染直接丢弃，并对环境进行消杀，紫外线灭菌、消毒液擦拭培养箱、工作台等。

对于重要且污染相对较轻的细胞：一般用抗生素的常用量的 5~10 倍作冲击疗法，用药 24~48 小时后再换常规培养液，需要注意的是：

一旦发生污染后再使用抗生素常常难以根除，有的抗生素只有抑菌作用而无杀菌效应。

且有研究表明，大量使用抗生素，或对细胞基因组产生影响。

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