产品目录
  • 细胞培养进口血清
    进口胎牛血清
    进口新生牛血清
    进口猪血清
    马血清
  • 支原体检测盒及标准品
    常规PCR检测试剂盒
    荧光定量PCR检测(qPCR法)
    支原体DNA提取
    灵敏度标准品(方法验证用)
    特异性标准品(方法验证用)
    PCR定量标准品(可用于方法验证)
  • 支原体祛除试剂
    细胞中支原体祛除
    环境支原体祛除
    水槽支原体祛除
  • 干细胞培养基
  • DNA/RNA污染祛除
    DNA/RNA污染祛除试剂
    DNA污染监测
  • RNA病毒研究试剂
    RNA病毒检测试剂盒
    病毒RNA提取
  • PCR仪器及配套产品
    DNA污染监测祛除
    PCR/qPCR仪性能检查
    PCR试剂
    PCR试剂盒
    PCR预混液(冻干粉)
    热启动聚合酶MB Taq DNA
  • 微生物PCR检测
    食品检测类产品
    食品微生物检测
    细菌PCR检测
欢迎来到 威正翔禹|缔一生物官方网站|咨询热线:400-166-8600
咨询热线
400-166-8600

产品目录
  • 细胞培养进口血清
    进口胎牛血清
    进口新生牛血清
    进口猪血清
    马血清
  • 支原体检测盒及标准品
    常规PCR检测试剂盒
    荧光定量PCR检测(qPCR法)
    支原体DNA提取
    灵敏度标准品(方法验证用)
    特异性标准品(方法验证用)
    PCR定量标准品(可用于方法验证)
  • 支原体祛除试剂
    细胞中支原体祛除
    环境支原体祛除
    水槽支原体祛除
  • 干细胞培养基
  • DNA/RNA污染祛除
    DNA/RNA污染祛除试剂
    DNA污染监测
  • RNA病毒研究试剂
    RNA病毒检测试剂盒
    病毒RNA提取
  • PCR仪器及配套产品
    DNA污染监测祛除
    PCR/qPCR仪性能检查
    PCR试剂
    PCR试剂盒
    PCR预混液(冻干粉)
    热启动聚合酶MB Taq DNA
  • 微生物PCR检测
    食品检测类产品
    食品微生物检测
    细菌PCR检测

细胞传代干货,建议收藏

2022-04-20 16:46来源:威正翔禹|缔一生物

Cell Culture

什么是细胞传代?

细胞传代培养(subculture),当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。


将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程被称之为细胞传代培养。对单层培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。


Vol .1

耗材准备


在实验开始前,需要把实验用品准备齐全。


酒精、预热好的完全培养基、PBS缓冲液、胰酶、培养瓶或培养皿、移液器、移液管、离心管等


实验用的超净工作台需提前半小时照射紫外线。


Vol .2

实验操作

以贴壁细胞培养为例


1、穿好细胞房专用的实验服,戴好灭菌手套和口罩。


2、从培养箱中取出细胞培养瓶或培养皿(Tip1:一般选择处于对数期的细胞),用75%酒精消毒外包装后转移至到超净台中。


3、打开盖子Tip2:如果是培养皿,只需打开一个缝隙即可,避免污染),轻轻吸出旧的培养液,加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次(Tip3:注意从未培养细胞的侧壁加入,以免冲掉细胞),弃去PBS缓冲液。


4、用移液器加入适量胰酶(Tip4:具体量根据实验需要确定,提前将胰酶37℃预热,效果更好),盖好盖子,“十字”晃动,使胰酶充分接触细胞。


5、将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜载物台,镜下观察细胞消化情况,当细胞变圆且大量脱落时,准备终止消化(Tip5:若初始的细胞密度比较高,加入胰酶后,肉眼也可观察到细胞脱落,当细胞有一左右脱落时,即可终止消化,避免反复将培养皿拿出超净台,避免增加污染的风险),用75%的酒精喷洒培养瓶表面,转移到超净台。


6、用移液器加入等量含血清培养基,终止消化。移液器充分且柔和地吹打,避免产生气泡,使细胞完全脱落。


7、将培养瓶或培养皿中混合液体转移至离心管中(离心管规格根据实验需要确定),配平后离心3-5分钟左右(离心机转速根据细胞种类而定,常见的有1000-3000rpm/min)。


8、离心好后,用酒精喷壶喷洒离心管表面,转移进超净台,打开盖子,将上清液倒入废液缸。


9、加入适量体积含血清培养基,用移液器或巴氏吸管轻轻吹打,制成细胞悬液。


10、将细胞悬液分装进2个(或多个)洁净灭菌培养瓶或培养皿中,加入适量培养基,盖好盖子。


11、将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台,观察细胞情况,细胞应保证一定数量,数量太少会影响生长情况。


12、在培养瓶上做标记,注明传代时间,细胞种类,操作人员等信息。在放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷培养瓶表面,然后应记得整理操作台,用75%酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。




好物推荐 ?

Ausbian

血清在细胞培养过程中的重要性不言而喻:


  • 提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。

  • 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调节它们所结合的物质活力。

  • 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。

  • 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

  • 起酸碱度缓冲液作用。

  • 提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,?;は赴皇苌撕Α?/span>

  • 参与细胞冻存。

    ......


一款优质的血清,绝对能成为细胞实验的“最强辅助”。


Ausbian进口特级胎牛血清与市面上其他品牌血清相比,有独特优势:

图片


1. 精选内毒素更低批次(≤3EU/ml),原装进口。是细胞典藏等重大项目十几年的稳定供应品牌。

2. 新批次在试用前,提供试用服务,养细胞更放心。

3. 每个批次产量800-2000升,试用满意的实验室批号优先锁定,保证大多数项目两年不需换批次,细胞试验数据稳定。

4. 每年按厂家生产顺序,会有多批次平行供应,每个实验室专属批号管理,保证供货稳定。

5. 为Ausbian血清用户免费提供申报支持,具有完整的检测报告,为各类项目的申报提供支持。(同时为血清VIP用户在支原体检测、方法学验证等方面,提供更多免费延伸性技术帮助)。

6. 针对特殊科研项目,可提供3-5个平行批次,让试验人有更多选择空间。

7. 为Ausbian血清提供免费代储存服务,为储存空间不足的实验室提供可靠的血清仓储?;?,按要求随时发货。

8. Ausbian血清从出厂,到实验室,全程低温冷链保护,确保血清无反复冻融。

9. 免费真品保障,每个血清瓶身加贴Viansaga?易破损防伪标签,Ausbian品牌真品?;ぃ昙俦鼐?,为实验室做好售后保障。

10. 免费无忧售后,所有实验室签收的Ausbian胎牛血清,从签收日开始计算,一年之内,血清在妥善保管、未开封未融化、且不影响二次销售的情况下,均可享受无条件退货或换货的售后保障。

11. 免费专业帮助,汇集近二十年,千万个血清用户细胞培养经验,为各种细胞培养提供问题梳理分析,解决方案参考。

12. Ausbian品牌拥有全系列血清产品线:

特级胎牛血清、细胞治疗专用胎牛血清(货号:WS500T(红点)),透析胎牛血清 (货号:VS500TZ   )等多系列产品,服务更专业更精准。



如果你对本公司产品感兴趣,想要了解更多,欢迎访问

北京缔一生物官网:

www.dyshengwu.com

上海威正翔禹生物网站:

www.cdhmbw.com

或联系北京缔一生物公司

咨询热线:

400-166-8600

010-84118494

021-64186645

13811167915

咨询QQ: 1580434811

咨询QQ: 1258888686

客服邮箱:servicebj@viansaga.com

客服邮箱:servicesh@viansaga.com




声明:本网站所有注明“来源:缔一生物”的内容,版权均属于北京缔一生物网站所有,受到知识产权的法律保护。如需引用、转载,须注明来源及原文链接。如内容涉及实质性修改,须来电获取书面授权,且转载时,须注明“来源:缔一生物”。

最终解释权归缔一生物所有。