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干货分享:细胞转染全攻略(上)2022-05-27 18:39来源:威正翔禹|缔一生物
细胞实验/ 转染 ![]() 定义:细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。 分类: 按转染途径可分为:细胞转染分为物理介导、化学介导和生物介导三类。 按转染结果可分为:瞬时转染和稳定转染 应用:在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中。 总结:转染,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。 1 不同转染途径的比较 1.物理介导:电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例。 2.化学介导:方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术。 3.生物介导:方法有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。 理论上,最理想的细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术,目前看来,虽然转染效率最高、细胞毒性低,但整个过程比较复杂复杂,常常对细胞类型有很强的选择性。 因此,无论采用哪种转染技术,想要获得**的转染结果,都需要对转染条件进行一定的优化。 影响转染效率的因素很多,从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态,到转染方法的操作细节,都需要考虑。 三种转染方法的优劣都给大家准备好了,有需要的同学可以截图保存。 ![]() ![]() ![]() 2 不同转染结果的比较 瞬时转染(transient transfection) 外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24~72h小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统和荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。 稳定转染(Stable transfected) 外源DNA既可以整合到宿主细胞中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记。如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。 血清在细胞培养过程中的重要性不言而喻:
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