反复冻融的血清对细胞有什么影响?

　　血清中因含有许多蛋白质，反复冻融对蛋白的活性肯定会有一定的影响，这似乎已众所周知。因此，如果几次内用不完，应尽量分装，这不仅适用于血清，也适用于其他储存于-20℃的蛋白质类产品。本文威正翔禹/缔一生物为您分析反复冻融的血清对细胞有什么影响？

　　曾有研究发现，血清冻融三次，对肿瘤标志物的浓度影响不大¹，对于血浆，有报道在短时间内反复冻融三次，对总蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影响不大，但作者推测对免疫球蛋白的活性有影响2。最重要的是一篇西北民族学院的文章，《反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响》，作者针对SP2/0细胞，用MEM培养基和三批新生牛血清进行培养。血清分别冻融4次至28次不等。然后绘制细胞生长曲线，根据公式t =T/A , A=log₂ Y/X计算细胞倍增时间（t 为细胞倍增时间， Y 为细胞峰值前1 d 的细胞数， X 为接种细胞数， T 为细胞生长时间）。结果显示：选用的三批新生牛血清在反复冻融 28 次时， 血清促细胞生长的**增殖量变化不大，均高于1×10⁶/mL, 但是血清促细胞生长的倍增时间在反复冻融 20次时延长， 即血清促细胞繁殖一代所需的时间在冻融次数达到 20 次时显著增加。笔者观察了一下该文章的结果列表，发现在冻融20次之前，细胞倍增时间延长2-3小时不等，20次时，则延长3-4小时。可见，影响还是比较显著的。该文章的局限是针对新生牛血清，而没有对胎牛血清进行测试。

　　国外有人对大鼠血清中的18种化学成分进行了检测，发现反复冻融3次对其中的14种成分没有显著影响，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，胆红素，甚至包括氯离子有一些明显变化，但其浓度变化控制在10%以内。³

　　总而言之，如果能避免牛血清的反复冻融，及时分装，那是最理想的。如果在短时间内有几次反复冻融，也不必过于担心。但是，对于胎牛血清，还有一个问题，是反复冻融增高了血清产生沉淀或浑浊的风险。因为血清在融化时，冰块和蛋白融化的速度是不一样的，局部可能因蛋白浓度过高而产生沉淀。同时，如果血清内含有少量纤维蛋白原，那么在低温下也可以形成絮状沉淀⁴，等到血清再融化时，沉淀就显现出来了。所以，血清的质量也非常重要。

　　参考文献

　　1、血清反复冻融对肿瘤标志物浓度的影响。 《中国实验诊断学》2007, 11 （1） :119-120

　　2、普通血浆短时间内反复冻融对血浆蛋白的影响。《中国输血杂志》， 2012 , 25 （11） :1209-1209

　　3、Effect of repeated freezing and thawing on 18 clinical chemistry analytes in rat serum. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS ·2012,51（4）：475-478

　　4、冻融法提取猪血纤维蛋白原。《分析试验室》，2007,26（4）：65-68

　　综上所述，您是不是已经对反复冻融的血清对细胞有什么影响，有所了解。如果还有其他疑问，请咨询威正翔禹/缔一生物资深专家免费热线：400-166-8600。