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MB支原体污染祛除试剂能解决细胞生长缓慢的问题吗?2022-12-23 15:57作者:缔一生物
![]() 进行细胞实验的过程中,相信大家都有这样的经历:实验规划恨不得精细到每小时,甚至连哪天出数据都预估好了。理想很丰满,现实往往很骨感!“隔壁王师兄的细胞都能传代了,我的这细胞,咋长得这么慢呢?”所以今天,我们就来聊聊,细胞生长缓慢(异常情况的慢,一些特殊细胞不在讨论范围内)的可能原因。原因很复杂,小编今天结合MB支原体污染祛除试剂总结以下几点,如果小伙伴们有更多观点,欢迎补充。 细胞可能存在污染各类细胞污染,都有可能导致细胞生长缓慢。如果培养体系,不小心被细菌、真菌、支原体污染,都会导致细胞因缺乏营养而出现生长缓慢的现象。 细菌污染发展迅速,一般会出现培养基浑浊、变黄的现象;真菌污染不好辨认,显微镜下可见丝状菌体(有些甚至严重到肉眼可见);而支原体污染往往防不胜防,显微镜下也很难捕捉到它的身影。支原体污染的典型特征是培养基提前变黄、细胞生长受阻,后期细胞大量死亡等。 因此,如果细胞生长缓慢,首先要考虑细胞是否存在污染。 没有根据细胞特性调整培养体系,细胞的体外培养,依赖于完全培养基的支持与保护。有些小伙伴拿到一株陌生的细胞,没有将培养体系研究清楚就开始实验,由于培养环境的改变,导致细胞一时无法适应,而出现生长受阻甚至停滞的状态。 当我们排除了细胞污染的情况后,就要考虑培养体系是否合理了:培养基种类、品牌是否进行过更换?血清类型是否用错等等,尽可能保证与原培养条件一致,如果要更换,也要循序渐进。 细胞初始状态较差细胞长得慢,很可能不是你的锅。可能最一开始复苏的细胞,就被污染/活力不足。因此,建议大家再复苏一管同种细胞(有可能不是同批次冻存的),与现有细胞进行比较,观察长势。 公共设备可能存在问题,仪器的参数也会影响细胞状态。如果细胞不存在污染,培养体系没有瑕疵、细胞初始状态也没有问题,那么可以考虑公共仪器设备是否存在纰漏。 最常见有水浴锅温度、室内温度及湿度、培养箱参数、水浴锅温度等。 水浴锅是细胞培养室常用的仪器,要定期用温度计对其工作温度进行检查,观察是否存在温度不准、温度骤变的情况。另外要强调一点,水浴锅也是常见的污染源之一,水浴锅中的水使用无菌水,并定期做好清洁工作,推荐大家使用MB WaterShield支原体污染祛除水槽专用祛除剂,可以有效清除、预防水槽中的支原体,方便安全、省时省力省心。 细胞实验室的温度及湿度:仪器还是操作对温度没有特殊要求,维持舒适的温度即可,比如18~26℃;过高的湿度会导致微生物的滋生,所以建议正常维持湿度在70%以下。应定期用温度湿度测试仪对细胞实验室进行检测,以防温控系统出现故障。 培养箱参数:一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37~38℃;大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2~7.4。在开放式培养中,以5%的二氧化碳气体比例为宜。但在实际操作过程中,细胞培养箱有可能会出现以下故障,影响细胞培养体系,进而使细胞生长变得缓慢: 温度和温度设定不准; 细胞培养箱湿度不能维持; 细胞培养箱的二氧化碳浓度不准。 对应解决方法给大家整理好,建议大家保存,以备不时之需。 实验人员可能发生变化,细胞“饲养员”的更换也可能影响细胞生长速率。作为一名合格的细胞“饲养员”,一定要预先了解所养细胞的“习性”:用哪种培养法、使用何种类型培养体系(血清种类、基础培养基类型、是否添加生长因子以及抗生素等),尽可能还原初始的培养环境,让细胞有个适应的过程。另外,实验者自身也要注意操作规范,按照标准流程培养。 实验试剂可能发生改变培养用的试剂也可能会是影响因素。 不同品牌的试剂可能会有些许差别,对于一些比较娇贵的的细胞,这些细微的差别很可能会导致细胞生长受到影响。因此我们一直强调大家“追本溯源”,尽可能用与原来一致的培养条件。 如果要更换试剂,建议大家先做个对照试验,看看新的试剂对细胞生长有没有影响。 另外,除了以上这六点,还有一点需要特别注意,就是:细胞的代次 一般来说,细胞传代次数是一定的(一些癌细胞系属于特例),特别是像间充质干细胞这类对代次比较敏感的细胞,需要格外注意,传代次数过高后(10-15代左右),细胞生长速率也会明显减慢。在实验时,尽量选择代次较低且状态稳定的细胞。 上一篇: 浅谈qPCR检测中「内参」的意义
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