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RT-PCR和real-time RT-PCR有何区别?

2024-01-04 16:29
文章附图

PCR技术随着时间的发展,分裂变化了很多种,今天分享的就是RT-PCR和real-time RT-PCR两种的区别和应用。


RT-PCR

RT-PCR被称为逆转录 PCR(reverse transcription PCR)或反转录PCR,结合了逆转录和聚合酶链式反应两个步骤,用于在实验室中复制和扩增特定的RNA序列。


逆转录

聚合酶链式反应


RT-PCR原理:

逆转录(Reverse Transcription): RT-PCR的**步是将RNA转录成相应的DNA。这个步骤涉及到逆转录酶(例如,逆转录酶或M-MLV逆转录酶),它能够将RNA模板转录成相应的互补DNA链。

PCR(Polymerase Chain Reaction): 在逆转录之后,产生的DNA(cDNA)成为PCR的模板。PCR利用DNA聚合酶(例如,Taq聚合酶)将目标DNA序列反复复制,通过循环的加热和降温过程,每个循环产生两倍的DNA。这样,目标序列得以大量扩增。

RT-PCR操作步骤

RT-PCR应用:

主要用于研究基因表达、检测RNA病原体、检测RNA病毒等。逆转录的过程将RNA转录成cDNA,后续使用PCR进行扩增。


real-time RT-PCR

real-time RT-PCR的中文名称是实时逆转录聚合酶链反应,是一种结合了逆转录(RT)和实时聚合酶链式反应(qPCR)的技术,用于从RNA样本中合成相应的cDNA,并在逆转录的同时实时监测和定量扩增特定的RNA序列。

图片


应用:

实时RT-PCR常用于研究基因表达的定量水平、检测和定量RNA病毒、评估病原体感染等。它可以提供实时、定量的结果,并且能在PCR反应过程中动态监测目标核酸的变化。