細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)白色絮狀物處理和預(yù)防措施

細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)白色絮狀物，一旦確定是污染所致，需及時(shí)采取相應(yīng)措施處理，以減少損失并防止污染擴(kuò)散。

細(xì)菌污染處理：當(dāng)確認(rèn)為細(xì)菌污染時(shí)，可先用含有抗生素的PBS溶液反復(fù)沖洗細(xì)胞，去除部分細(xì)菌。常用的抗生素包括青霉素、鏈霉素等，其聯(lián)合使用效果較好，青霉素濃度一般為100 U/mL，鏈霉素濃度為100 μg/mL。然后更換含有抗生素的新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，持續(xù)3~5天，期間密切觀察細(xì)胞狀態(tài)和培養(yǎng)液的變化。若污染較為嚴(yán)重，且細(xì)胞價(jià)值不高，建議果斷丟棄受污染的細(xì)胞，以防止污染進(jìn)一步擴(kuò)散。

真菌污染處理：對于真菌污染，可采用抗真菌藥物進(jìn)行處理。兩性霉素B是一種常用的抗真菌藥物，其使用濃度一般為0.25~2.5 μg/mL。在使用過程中需注意藥物的細(xì)胞毒性，避免對細(xì)胞造成過大損傷。此外，還可使用氟康唑等抗真菌藥物，其使用濃度和處理時(shí)間需根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)整。若污染難以控制，且細(xì)胞對實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要，可嘗試使用支原體清除培養(yǎng)基進(jìn)行處理。這種培養(yǎng)基含有特殊的成分，能夠有效抑制和殺滅真菌，同時(shí)對細(xì)胞的影響較小。

霉菌污染處理：霉菌污染的處理較為困難，建議果斷舍棄受污染的細(xì)胞。同時(shí)，需對培養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行徹底消毒，包括培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、器皿等。可采用75%酒精對培養(yǎng)箱進(jìn)行擦拭，再用新潔爾滅進(jìn)行消毒處理。此外，還需對培養(yǎng)箱的水盤進(jìn)行處理，可加入飽和量的硫酸銅溶液，以防止霉菌孢子的滋生。

支原體污染處理：支原體污染較為隱蔽，處理難度較大。可使用支原體清除培養(yǎng)基進(jìn)行處理，其含有特殊的成分，能夠有效抑制和殺滅支原體。此外，還可使用環(huán)丙沙星等抗生素進(jìn)行處理，其使用濃度一般為20 μg/mL。在處理過程中，需定期更換培養(yǎng)基，并密切觀察細(xì)胞狀態(tài)。若污染較為嚴(yán)重，且細(xì)胞價(jià)值不高，建議丟棄受污染的細(xì)胞。

預(yù)防污染策略

預(yù)防污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，以下是一些有效的預(yù)防措施。

嚴(yán)格無菌操作：實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入培養(yǎng)室前需更換專用實(shí)驗(yàn)服和拖鞋，洗手并戴口罩和手套。在操作過程中，需靠近火焰進(jìn)行操作，試劑瓶需經(jīng)火焰灼燒消毒。吸管使用后需及時(shí)更換，避免交叉污染。細(xì)胞和培養(yǎng)基的敞口時(shí)間應(yīng)盡量縮短，以減少污染的風(fēng)險(xiǎn)。

培養(yǎng)環(huán)境管理：定期對培養(yǎng)室進(jìn)行清潔和消毒，保持培養(yǎng)室的整潔和干燥。培養(yǎng)箱需定期進(jìn)行消毒，可采用紫外線照射或化學(xué)消毒劑進(jìn)行消毒。培養(yǎng)箱的水盤需定期更換水，并加入德國MB公司生產(chǎn)的Water Shield?支原體污染防護(hù)劑（水槽用）。Water Shield?可持續(xù)作用四周，使水源避免受到支原體、細(xì)菌、真菌、霉菌、孢子的污染。超凈工作臺(tái)需定期進(jìn)行維護(hù)和消毒或使用
Mycoplasma Off?支原體祛除噴霧劑，不僅能根除支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病
毒、真菌孢子等。

培養(yǎng)基和試劑管理：培養(yǎng)基和試劑需從正規(guī)渠道購買，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行保存和使用。培養(yǎng)基應(yīng)放置于4℃，避光保存，并盡量在一周內(nèi)使用完畢。試劑瓶需密封保存，避免受潮和污染。在使用培養(yǎng)基和試劑前，需進(jìn)行外觀檢查，確保其無變質(zhì)和污染。

細(xì)胞管理：定期對細(xì)胞進(jìn)行檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理潛在的污染。細(xì)胞傳代時(shí)需嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，避免操作不當(dāng)導(dǎo)致污染。細(xì)胞的接種密度需適中，避免過高或過低的接種密度影響細(xì)胞的生長和代謝。對于珍貴的細(xì)胞系，建議建立細(xì)胞庫，以便在污染發(fā)生時(shí)能夠及時(shí)恢復(fù)。