【系列2】胎牛血清RNA干扰了细胞培养外源性RNA

（e）基于主要的RNA的组合物的对数变换后的数据的皮尔逊聚类分析显示来自三个粒料样品三个上清液样品分离（表示为S）（表示为P）。

（f）在最丰富的miRNA在FBS的沉淀和上清液的级分（24小时UC）通过RNA-SEQ所检测。值得注意的是，的miR-451不从NEBNext小RNA文库进行测序。

（g）FBS的沉淀和上清液中选择的miRNA的水平通过qRT-PCR测定。每组n=3的FBS等分试样。

（h）牛和灵长类特异性的miR-1246是通过qRT-PCR在小鼠培养的细胞，但不小鼠组织检测。N=3的细胞或每组组织切片。*P<0.05;**P<0.01;NS，不显著。所有的棒表示平均±SEM所示。

RNA，不能从FBS的使用超速离心耗尽

我们接下来设置来表征FBS的RNA的组合物，并调查是否RNA可从血清中除去。血清的RNA与外来体和其他电动汽车，以及非膜脂和蛋白质的RNP相关联。大多数研究人员使用70000克到110000克UC2小时，18小时，生产vdFBS。

已经证实，长时间的UC除去大部分，虽然不是所有的电动车，如通过NanoSight监测12。但是，什么延长vdFBS是RNA耗尽尚不清楚。为了解决这个问题，我们纺丝FBS的样品以100,000g为80分钟，5小时，或24小时，并分离总RNA从沉淀（即EV-富集）材料和上清液（即EV-耗尽。RNA也从在基线粗FBS的隔离。5-40纳克/毫升总RNA从粗FBS分离，鳞和批次间变化，并与人血清的以前的评估一致13。如图所示。1c中，即使是长时间的24小时的UC延伸超过报协议，仅除去从FBS（RNA的（19-33％）的一部分图1c）。平均起来，vdFBS制剂含有34纳克/毫升的RNA，其中大部分是最有可能与非囊泡复合物，如的RNP相关联。无论该RNA（水泡与否）的源，它可以潜在地污染细胞培养物条件培养基和共分离物/沉淀用在随后的程序在细胞培养的电动汽车。

FBS包含人类和小鼠的成绩单无法区分保守的RNA种类多样的剧目

为了进一步评价FBS RNA与衍生exRNA细胞培养干扰的潜力，我们进行了FBS分数RNA深度测序。FBS的三个不同批次100,000g下离心24小时，并从沉淀的EV-富集级分和EV-耗尽上清中分离的RNA样品用于NEBNext小RNA文库的构建，随后HiSeq2000RNA的起。阅读映射人类基因组hg19版本使用摘录Genboree工作台的小RNA-SEQ管道V2.2.8使用默认参数进行14。平均而言,13.6％和21.7％读取来自“沉淀的RNA”和“上清液的RNA”的级分，分别映射到人类基因组，这表明FBS相关转录的显著一部分进化上保守的，并且可以有助于假阳性人类细胞的分析。具有精确无失配**的映射允许，9.2％和各个级分的13.2％中读取映射到人类基因组。两个级分的主要的RNA的组合物，表示每百万映射（RPM），为读出，示于图1D。