细胞培养环境的无菌控制

细胞培养中的

无菌环境

通常情况下，细胞培养需要在严格的无菌条件下进行，既包括无菌环境，也包括无菌操作。今天就“细胞培养过程中，环境的无菌控制”这一话题，给大家分享一些小技巧，希望可以给各位的实验提供帮助。

无菌室的结构：

一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。

无菌室需进行定期消毒和防污染处理：

1、采用每日（使用前）紫外照射（1－2小时）。

2、每周甲醛或过氧乙酸熏蒸（2小时），如果为了节省时间，也可以每周用新洁尔灭擦拭地面墙壁、桌面方式进行消毒。另外，在实际操作过程中，还应考虑无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。

3、防止无菌室的污染：通风系统出风口滤膜定期更换；进出无菌室时，避免外界空气直接对流进无菌室的操作间。

4、定期使用支原体祛除试剂对桌面进行喷洒或擦拭。

超净工作台的工作原理：

鼓风机将外界空气抽进超净台，通过高效过滤器净化，祛除空气中的微生物，净化的空气吹过超净台的内部空间，而将尘埃、细菌、病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。

由于气流在超净工作台中多的流动方向不同，因此可以将超净工作台分为侧流式、直流式和外流式三种类型。

超净台的使用与保养：

1、超净台的平均风速一般保持在0.32-0.48米/秒，过大、过小均不利于保持台面洁净。

2、使用前建议开启超净台内紫外灯照射30分钟，然后打开通风系统，让超净台预工作3-5分钟，以除去紫外线照射产生的臭氧。

3、使用完毕后，要用75%酒精将台面和台内四周擦拭干净，以保证超净台无菌。还要定期用支原体祛除试剂清洁超净台。

细胞培养需要一些仪器与大量耗材，比如离心机、移液器、显微镜、培养皿、移液管、离心管等，因此掌握清洗、消毒知识是从事细胞培养工作所必须的。

1、耗材的消毒

尽量选择经过灭菌的一次性耗材，移液器枪头可选择顶部有无菌塞的产品，避免气溶胶污染。

2、仪器的消毒

对于显微这样的精密仪器，用专门的消毒纸巾进行擦拭，离心机、移液器可用75%的酒精进行擦拭。

水浴锅、培养箱中的水应至少每4周更换一次，建议加入水槽专用的支原体祛除试剂，预防支原体污染。

仪器也可采用紫外线照射的方法进行消毒：

紫外灯的消毒效果与紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关，而辐射强度随灯距离增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。因此紫外灯同被照射物的距离和照射时间要适合。

一般来说：距离地面高2米的30W紫外线灯可照射9平方米左右的房间，照射时间为1-2小时。灯管离地面2米以外要延长照射时间，2.5米照射效果较差。紫外灯照射工作台的距离不应超过1.5米，照射时间30分钟为宜。

需要注意的是，紫外线容易使移液器的塑料外壳老化，因此不建议长时间照射。

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