常规细胞实验大汇总（一）

细胞增殖实验

MTT法：又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。

检测原理：

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

用途：广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

特点：灵敏度高、经济。

CCK-8法：又称细胞增殖和细胞毒性实验。

检测原理：

该试剂中含有WST-8，在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan dye）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

用途：广泛用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。

特点：对细胞毒性小，可以多次测定选取**测定时间；检测迅速；灵敏度高

BrdU法：直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞增殖能力。

检测原理：

用BrdU预处理的细胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，而且这种置换可以稳定存在，并带到子代细胞中。细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量(如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记，最后用比色法或荧光的方法进行定量测定)，从而判断细胞的增殖能力。

用途：可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。

特点：简单、快速、安全，检测的敏感性好；适合于大块组织的快速检查，尤适于定量研究；BrdU既可用于活体标记，亦可用于细胞或组织细胞增殖、分化的标记。副作用低；此方法的缺点是标记时间较短。

检测原理：

EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

用途：在细胞水平上EdU对增殖细胞的标记，对植物增殖细胞进行标记并检测、细胞示踪实验等。

特点：EdU法检测细胞增殖，无需抗体，无变性步骤，保持细胞形态和DNA完整性。

细胞凋亡

磷脂酰丝氨酸外翻分析：又叫做Annexin V法，常用来检测细胞凋亡。

检测原理：

磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

用途：用于区分早期凋亡的细胞与晚期凋亡加坏死的细胞。最适合悬浮培养的细胞。

特点：某些细胞的细胞膜外表面带有大量的PS，因而也不能使用该方法(比如巨核细胞、血小板、某些骨髓系细胞)；灵敏度高、方便快捷；只适用于活细胞，不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。