常规细胞实验大汇总（二）

在上期介绍过一些检测细胞增殖，细胞凋亡的常规方法。

今天来到常规实验大汇总的第二期，一起来学习细胞膜片钳技术、细胞迁移和侵袭技术。

细胞膜片钳技术：

膜片钳技术（patch clamp techniques）是采用钳制电压或电流的方法对生物膜上离子通道的电活动进行记录的微电极技术。

检测原理：

用一个尖端直径在1.5-3.0um的玻璃微电极接触细胞膜表面，通过负压吸引使电极尖端与细胞膜之间形成千兆欧姆以上的阻抗封接，此时电极尖端下的细胞膜小区域（膜片, patch）与其周围在电学上分隔，在此基础上固定（钳制, Clamp）电位，对此膜片上的离子通道的离子电流进行监测及记录。

用途：

细胞膜片钳技术是当前研究细胞膜电流及离子通道的最重要的技术。可用于研究与药物作用有关的心肌离子通道、离子通道生理与病理作用机制。另外，还利用膜片钳对单细胞形态与功能关系的研究、对药物作用机制的研究、创新药物研究与高通量筛选研究、甚至是能用在神经科学的相关研究中。

由于其应用广泛，因此被称为研究离子通道的“金标准”。

特点：

实用、快速、灵敏、准确及重复性好，并且还在不断地改良、优化。

细胞迁移和侵袭 Transwell：

是一种用来研究细胞侵袭的实验技术。

检测原理：

简单来说，就是用一层膜将高营养的培养基与低营养的培养基分隔开。然后将细胞放在低营养的培养基中，细胞为了生存，为了获取更多的营养，会向高营养的培养基里面移动。但是由于膜的存在，因此必须要进行穿膜。

在膜上涂上一层基质胶，用来模仿细胞外基质。细胞想要通过膜，就需要先把基质消化了才能进入高营养培养基中。最终只需要检测高营养的培养基中的细胞量就推算出细胞的侵袭能力。

用途：

由于商品化Transwell试剂盒的出现，使得滤膜多样化，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

特点：

高效、迅速，普适度高，可应用于多种实验。

划痕实验：

也叫创伤愈合实验，是一种简单快捷的测定细胞迁移运动与修复能力的方法。

检测原理：

在体外培养条件下，在培养皿中的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它无菌的硬物在细胞生长的中央区域划线，用以去除中央部分的细胞，然后按照实验设定的时间（36h、72h等），继续培养细胞。取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长至中央划痕区，以此判断细胞是否生长至中央划痕区，进而判断细胞的生长迁移能力。

实验通常还需设定正常对照组和实验组,实验组往往是加了某种处理因素、药物或外源性基因等，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，来判断各组细胞的迁移与修复能力。

用途：

可以用来确定贴壁细胞的迁移速率。

特点：

简捷、成本低、实验结果直观。但测量适用的细胞范围较小，一般只适用于上皮细胞，纤维样细胞。

Ausbian血清在细胞培养过程中的重要性不言而喻：