【系列2】胎牛血清RNA干扰了细胞培养外源性RNA

在细胞衍生exRNA特定miRNA的富集可能是由FBS的衍生的RNA污染造成的。

几个观察表明FBS的相关联的RNA可能与exRNA的干扰分析。

首先，我们检测到高水平的miR-122，在肝脏中大量表达，但未被发现在其他组织中的特定的miRNA的2,3，在作为单层或神经球（培养的神经胶质瘤细胞系的条件培养基图1a）?？悸堑饺鄙僭诔山褐?span style="font-size:15px;color:#FF0000;">细胞瘤肿瘤中的miR-122表达的4和培养的神经胶质瘤细胞（图1a）中，我们合理化，这一发现可以通过任一异常有效的miR-122的分泌来解释，或更可信，培养基作为主源这种miRNA的。实际上，的miR-122在神经胶质瘤细胞培养物中使用的新鲜无条件媒体高度丰富（图1b），这表明在经调节的培养基中的大多数的miR-122的来自于培养基成分，而不是细胞分泌。另一具体微小RNA中，miR-451A，在不同细胞和组织中的血表示具有最高丰度2，在由各种细胞类型分泌的电动汽车被报告为最富集的miRNA 5 ,6 ，7 ，8 ，9 ，10 ，11 。与这些发现一致的是，我们发现的miR-451A在从在DMEM/10％vdFBS（生长U251和20/3胶质瘤单层培养物的条件培养基中分离的丸状电动汽车富集图1a）。

然而，当相同的细胞系在相同的葡萄糖浓度，但在无血清的神经球促进条件下培养，未在超速离心检测的miR-451A（UC）粒料/exRNA级分（图1a）。为了更好地理解不同培养基的贡献，我们分离从新鲜无条件“单层培养基”总exRNAs（2D培养基含有DMEM/10％FBS），囊泡贫2D培养基（VD2D含有FBS的24小时后，UC），和“神经球介质”（3D介质，无血清），并使用定量RT-PCR测量的miR-451A水平。MIR-451A是丰富的2D介质，在VD2D介质略微减少，并且在3D介质（勉强检测图1b）。

值得注意的是，的miR-122和miR-451 VD2D媒体相对于所述粗2D介质中的水平降低到一个不同的程度，但不能完全消除。虽然该培养条件影响的RNA分泌的可能性不能被排除，这些研究结果表明，基于UC的囊泡耗尽不完全从FBS/培养基消除RNA和该FBS的相关联的RNA可能导致错误的结果和解释，如此前公布的miR-451A富集exRNA。

图1：FBS衍生的RNA干扰exRNA和细胞RNA的RNA分析。